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Transwell遷移/侵襲

本實驗的目的主要是檢測腫瘤細胞體(tǐ)外的侵襲能(néng)力，這項技(jì )術的主要材料是Transwell小(xiǎo)室。

所屬分(fēn)類：

關鍵詞：Transwell遷移/侵襲
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應用(yòng)簡介

　　本實驗的目的主要是檢測腫瘤細胞體(tǐ)外的侵襲能(néng)力，這項技(jì )術的主要材料是Transwell小(xiǎo)室，Transwell小(xiǎo)室是用(yòng)一層膜将高營養的培養液和低營養的培養液隔開，置于低營養培養液的細胞會穿過膜往高營養培養液遷移，在膜上塗上一層基質(zhì)膠來模仿細胞外基質(zhì)，細胞消化基質(zhì)膠後就可(kě)以從低營養培養液遷移到高營養培養液裏，檢測高營養裏的細胞量就可(kě)以判斷細胞的侵襲能(néng)力。使用(yòng)不同孔徑、經過不同處理(lǐ)的聚碳酸酯膜，就可(kě)以進行共培養、細胞趨化、細胞遷移，細胞侵襲等多(duō)方面的研究。

技(jì )術原理(lǐ)

　　腫瘤細胞通過膜表面特定受體(tǐ)與基質(zhì)或基底膜粘連，而後可(kě)以釋放蛋白水解酶或激活基質(zhì)中(zhōng)已存在的酶原，降解基質(zhì)，最後細胞運動而充填到被水解的基質(zhì)空隙處。這個過程不斷重複，腫瘤細胞則不斷地向深層侵襲。

實驗方法 

　　Step 1：包被基質(zhì)膠；

　　Step 2：細胞鋪闆；

　　Step 3：固定染色；

　　Step 4：拍照；

　　Step 5：結果處理(lǐ)。

技(jì )術總結

　　(1)無菌操作(zuò)。本實驗操作(zuò)流程比較複雜，在實驗過程中(zhōng)尤其要注意無菌操作(zuò)。

　　(2)包被基底膜的操作(zuò)要在冰上進行，否則Matrigel在室溫中(zhōng)還沒有(yǒu)包被完成就已經凝固了。

　　(3)在加樣的過程中(zhōng)以及在取放培養闆的過程中(zhōng)都要小(xiǎo)心，動作(zuò)輕柔，防止下層培養液和小(xiǎo)室之間産(chǎn)生氣泡。一旦産(chǎn)生氣泡，下層培養液的趨化作(zuò)用(yòng)就減弱甚至消失了。

　　(4)接種細胞後的培養時間一般為(wèi)12~48h，但是這還要根據細胞惡性程度以及侵襲能(néng)力的大小(xiǎo)而定，做好在正實驗前做好預實驗。

 

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