實驗平台

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實驗平台

　　賽因斯特細胞平台以細胞生物(wù)學(xué)實驗為(wèi)基礎，包括細胞培養、形态觀察和成像、細胞化學(xué)指标檢測、細胞分(fēn)子生物(wù)學(xué)等常規實驗檢測指導和研究服務(wù)。内設超淨工(gōng)作(zuò)台、二氧化碳培養箱、倒置熒光顯微鏡、恒溫培養搖床、台式多(duō)功能(néng)低溫離心機、顯微操作(zuò)系統、儲存式液氮罐、細胞計數儀、流式細胞儀等。可(kě)獨立開展CCK8、Transwell遷移與侵襲、細胞劃痕、質(zhì)粒轉染、模型建立、流式周期凋亡、流式細胞分(fēn)型等多(duō)種細胞實驗。公(gōng)司細胞庫凍存有(yǒu)五百餘種細胞。

細胞實驗平台

　　細胞活性是進行細胞生物(wù)學(xué)實驗的一項重要指标，是評價細胞培養、細胞毒性及生理(lǐ)常用(yòng)的方法有(yǒu)CCK8法，MTT法。

　　MTT:

　　MTT為(wèi)粉末狀黃色化合物(wù)。MTT可(kě)以被活細胞線(xiàn)粒體(tǐ)中(zhōng)的一些琥珀酸脫氫酶還原生成水不溶性的結晶狀的深紫色産(chǎn)物(wù)甲臜(formazan)，并沉積在細胞中(zhōng)，在特定溶劑存在的情況下，可(kě)以被完全溶解，而死細胞無此功能(néng)。檢測波長(cháng)：570nm

　　CCK8:

　　CCK-8試劑的顔色為(wèi)淡紅色液體(tǐ)。CCK-8試劑中(zhōng)含有(yǒu)WST-8 ，它在電(diàn)子載體(tǐ) 1- 甲氧基 -5- 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS )的作(zuò)用(yòng)下被細胞線(xiàn)粒體(tǐ)中(zhōng)的琥珀酸脫氫酶還原為(wèi)具(jù)有(yǒu)高度水溶性的黃色甲臜産(chǎn)物(wù)(Formazan)。檢測波長(cháng)：450nm

細胞實驗平台

細胞增殖越多(duō)越快，則顔色越深，吸光度越大;

細胞毒性越大，則顔色越淺，吸光度越小(xiǎo)。

對于同樣的細胞，顔色的深淺和細胞數目呈線(xiàn)性關系。

細胞劃痕實驗

　　細胞劃痕實驗是一種操作(zuò)簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體(tǐ)外試驗方法。這種方法的原理(lǐ)是，當細胞長(cháng)到融合成單層狀态時，在融合的單層細胞上人為(wèi)制造一個空白區(qū)域，稱為(wèi)“劃痕”，劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合，在一定程度上模拟了體(tǐ)内細胞遷移的過程，是研究細胞遷移的體(tǐ)外實驗中(zhōng)簡單的方法。

細胞遷移/侵襲實驗(Transwell)

　　實驗原理(lǐ)：将細胞小(xiǎo)室(Transwell小(xiǎo)室)放入培養闆中(zhōng)，小(xiǎo)室内稱上室，培養闆内稱下室，上室内盛裝(zhuāng)上層培養液，下室内盛裝(zhuāng)下層培養液，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔。我們将細胞種在上室内，由于聚碳酸酯膜有(yǒu)通透性，下層培養液中(zhōng)的成分(fēn)可(kě)以影響到上室内的細胞，從而可(kě)以研究下層培養液中(zhōng)的成分(fēn)對細胞生長(cháng)、運動等的影響。

細胞轉染

　　細胞轉染是指将外源分(fēn)子(如DNA，RNA等)導入(真核) 細胞的實驗技(jì )術之一。随着分(fēn)子生物(wù)學(xué)和細胞生物(wù)學(xué)研究的不斷發展，轉染已經成為(wèi)研究和控制真核細胞基因功能(néng)的常規工(gōng)具(jù)。除轉染以外，關于基因片段轉移的方法還有(yǒu)很(hěn)多(duō)，像轉化，轉導，感染等。

　　細胞轉染可(kě)分(fēn)為(wèi)瞬時轉染和穩定轉染：

　　瞬時轉染指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體(tǐ)中(zhōng),通常隻持續幾天，在轉染後24-96小(xiǎo)時内分(fēn)析結果，多(duō)用(yòng)于啓動子和其他(tā)調控元件的分(fēn)析。

　　穩定轉染指外源DNA既可(kě)以整合到宿主染色體(tǐ)中(zhōng)。通常需要通過一些選擇性标記來篩選以得到穩定轉染的細胞系。根據轉染方法可(kě)以分(fēn)為(wèi)物(wù)理(lǐ)介導、化學(xué)介導和生物(wù)介導。

雙熒光素酶報告實驗