MTT/CCK8

細胞增殖是指細胞經過DNA複制、RNA轉錄和蛋白質(zhì)合成等反應而進行的分(fēn)裂過程。

所屬分(fēn)類：

細胞生物(wù)學(xué)

關鍵詞：MTT/CCK8

産(chǎn)品咨詢

細胞增殖檢測——MTT檢測法

應用(yòng)簡介

　　細胞增殖是指細胞經過DNA複制、RNA轉錄和蛋白質(zhì)合成等反應而進行的分(fēn)裂過程。單細胞生物(wù)，以細胞分(fēn)裂的方式産(chǎn)生新(xīn)的個體(tǐ)；多(duō)細胞生物(wù)，以細胞分(fēn)裂的方式産(chǎn)生新(xīn)的細胞，用(yòng)來補充體(tǐ)内衰老或者死亡的細胞。細胞增殖是生物(wù)體(tǐ)生長(cháng)、發育、繁殖和遺傳的基礎。細胞增殖檢測是指檢測分(fēn)裂中(zhōng)的細胞數量或者細胞群體(tǐ)發生的變化。常用(yòng)的細胞增殖檢測方法包括：胸腺嘧啶核苷滲入法、MTT/CCK8檢測法、羟基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）檢測法等。

技(jì )術原理(lǐ)

　　利用(yòng)活細胞線(xiàn)粒體(tǐ)中(zhōng)的琥珀酸脫氫酶在代謝(xiè)過程中(zhōng)，能(néng)将外源性可(kě)溶性四唑鹽MTT還原為(wèi)水不溶性的藍紫色結晶甲瓒顆粒，并沉積在細胞中(zhōng)，而死細胞無此功能(néng)。在一定細胞數範圍内，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。二甲基亞砜（DMSO）能(néng)溶解細胞中(zhōng)的甲瓒顆粒，用(yòng)酶标儀在490nm波長(cháng)處檢測其吸光度值，可(kě)間接反映活細胞數量。

實驗方法

　　Step 1：細胞鋪闆

　　Step 2：藥物(wù)作(zuò)用(yòng)

　　Step 3：加入MTT

　　Step 4：DMSO溶解

　　Step 5：上機檢測

　　Step 6：數據處理(lǐ)

技(jì )術總結

　　MTT法簡便、經濟、快速且無放射性。但因需加入DMSO溶解甲瓒顆粒，且往往因溶解不完全而對實驗結果造成影響，故重複性差；并且MTT法是終點檢測，結果具(jù)有(yǒu)局限性。

CCK-8檢測法

技(jì )術原理(lǐ)

　　CCK-8全稱Cell Counting Kit-8，CCK-8溶液中(zhōng)含有(yǒu)WST-8，在電(diàn)子耦合試劑存在的條件下，被活細胞線(xiàn)粒體(tǐ)内的脫氫酶還原成橙黃色的甲臜産(chǎn)物(wù)，此産(chǎn)物(wù)的顔色深淺與細胞增殖程度成正比，而與細胞毒性程度成反比。通過測量甲臜産(chǎn)物(wù)生成的顔色強度，可(kě)以間接評估細胞的增殖活力和毒性水平。