細胞胞内/核内抗原檢測

大多(duō)數的表型分(fēn)子都位于細胞的表面，所以标記這些位于細胞表面的抗原分(fēn)子的熒光素偶聯抗體(tǐ)時隻需直接将抗體(tǐ)加入到樣品細胞中(zhōng)即可(kě)。

所屬分(fēn)類：

流式細胞術

關鍵詞：細胞胞内/核内抗原檢測

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　　大多(duō)數的表型分(fēn)子都位于細胞的表面，所以标記這些位于細胞表面的抗原分(fēn)子的熒光素偶聯抗體(tǐ)時隻需直接将抗體(tǐ)加入到樣品細胞中(zhōng)即可(kě)。但有(yǒu)些表型分(fēn)子不是位于細胞的表面，而是位于細胞的内部，如調節性T細胞的标志(zhì)性轉錄因子Foxp3、結合核酸類配體(tǐ)的TLR受體(tǐ)、與HIV病程密切相關的谷胱甘肽(glutathione,GSH)等。标記這些位于細胞内部的表型分(fēn)子時，就不能(néng)直接将熒光素偶聯抗體(tǐ)加入到樣品細胞中(zhōng)，因為(wèi)這些抗體(tǐ)無法直接進入活細胞内部，就不能(néng)與抗原分(fēn)子直接結合，因此應先将細胞固定，用(yòng)打孔劑在細胞膜上打孔後，再加入熒光素偶聯抗體(tǐ)，此時抗體(tǐ)就可(kě)以通過細胞膜上的小(xiǎo)孔進人細胞内部與細胞内的抗原分(fēn)子結合。

　　1、在流式管中(zhōng)加入單細胞懸液，按說明書加入表面抗體(tǐ)。渦旋震蕩混勻，室溫避光孵育15-30分(fēn)鍾或冰上孵育30-60分(fēn)鍾；

　　2、每管加入固定試劑，震蕩混勻，室溫避光孵育；

　　3、每管加入3 ml預冷流式染色緩沖液，2-8℃300-500×g離心5分(fēn)鍾，棄上清；

　　4、每管加入破膜試劑和胞内抗體(tǐ)。渦旋混勻，避光孵育30-60 min；

　　5、每管加入3 ml流式染色緩沖液，2-8℃300-500×g離心5分(fēn)鍾，棄上清；

　　6、每管加入500μl流式染色緩沖液重懸，上機檢測。