流式測定細胞因子（CBA法）
所屬分(fēn)類：
CBA(cytometric bead array)法是新(xīn)發展起來的利用(yòng)流式細胞術測定細胞因子的新(xīn)方法，該方法直接檢測分(fēn)泌到細胞外的處于遊離狀态的細胞因子。流式細胞術不能(néng)直接檢測細胞因子，CBA技(jì )術利用(yòng)人工(gōng)合成的微球(如直徑為(wèi)7.5m的聚苯乙烯微球)代替細胞，在該微球上包被細胞因子抗體(tǐ)，當待測樣品中(zhōng)含有(yǒu)相應的細胞因子時，人工(gōng)微球上的抗體(tǐ)能(néng)夠與細胞因子結合，然後再加入PE偶聯的抗細胞因子抗體(tǐ)，該PE偶聯抗體(tǐ)就可(kě)以與微球上結合的細胞因子結合，形成“三明治夾心”結構，如圖1-1所示。其基本原理(lǐ)與ELISA法檢測細胞因子具(jù)有(yǒu)相似之處，隻是ELISA法利用(yòng)的是酶系統，通過使底物(wù)顯色，比較顔色的深淺來定量細胞因子，而CBA法利用(yòng)的是熒光系統，通過激發PE熒光素，分(fēn)析熒光信号的強弱來定量細胞因子。
圖1-1 CBA法原理(lǐ)示意圖
方法:
(1)各分(fēn)析管中(zhōng)加人50ul混合的人工(gōng)微球。
(2)各分(fēn)析管中(zhōng)加入50ul待測細胞培養上清或者血清。
(3)各分(fēn)析管中(zhōng)加入50ul混合的PE偶聯抗體(tǐ)。
(4)充分(fēn)混勻，室溫靜置3h,避光處理(lǐ)。
(5)各分(fēn)析管中(zhōng)加人1ml洗液，離心沉澱，棄上清。
(6)200ul流式PBS重懸沉澱，流式上樣分(fēn)析。
實驗對象
1血清、血漿；
2眼淚、房水、唾液、體(tǐ)腔灌洗液；
3細胞培養液上清、細胞裂解物(wù)等。
以IL-6為(wèi)例
IL-6的标準曲線(xiàn)
注！送樣要求：-80℃保存，幹冰運輸。
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