鈣離子檢測

Fluo-4是一種将Fluo-3結構中(zhōng)的Cl替換成F的鈣熒光探針。

所屬分(fēn)類：

流式細胞術

關鍵詞：鈣離子檢測

産(chǎn)品咨詢

檢測原理(lǐ)：

　　Fluo-4是一種将Fluo-3結構中(zhōng)的Cl替換成F的鈣熒光探針。Fluo-4，AM穿透細胞膜進入細胞後被細胞内的酯酶剪切形成Fluo-4，從而滞留在細胞内，Fluo-4若以遊離配體(tǐ)形式存在時，幾乎是非熒光的，但當它與細胞内鈣離子結合後可(kě)産(chǎn)生較強的熒光，最大激發波長(cháng)為(wèi)494nm，最大發射波長(cháng)為(wèi)516nm。實際檢測時推薦使用(yòng)的激發波長(cháng)為(wèi)488nm左右，發射波長(cháng)為(wèi)512-520nm。

　　1、取适量Fluo-4 AM母液，用(yòng)PBS稀釋成工(gōng)作(zuò)液；

　　2、去除培養液，用(yòng)PBS洗滌3次；

　　3、加入Fluo-4 AM工(gōng)作(zuò)液，溶液量以能(néng)充分(fēn)覆蓋細胞為(wèi)準；

　　4、20ºC-37ºC孵育10-60分(fēn)鍾進行熒光探針裝(zhuāng)載；

　　5、用(yòng)PBS洗滌3次，洗滌後可(kě)以考慮适當再孵育20-30分(fēn)鍾以确保Fluo-4 AM在細胞内完全轉變成Fluo-4；

　　6、用(yòng)流式細胞儀檢測Fluo-4的熒光，以确定細胞内鈣離子濃度的變化。

　　檢測參數：Fluo-4可(kě)以和鈣離子結合，結合鈣離子後可(kě)以産(chǎn)生較強的熒光，最大激發波長(cháng)為(wèi)494nm，最大發射波長(cháng)為(wèi)516nm。檢測時使用(yòng)的激發波長(cháng)為(wèi)488nm，發射波長(cháng)為(wèi)512-520nm，即FITC通道。