活性氧（ROS）檢測

DCFH-DA本身沒有(yǒu)熒光，可(kě)以自由通過細胞膜，進入細胞以後，可(kě)以被細胞内的酯酶水解生成DCFH。

所屬分(fēn)類：

流式細胞術

關鍵詞：活性氧（ROS）檢測

産(chǎn)品咨詢

　　DCFH-DA本身沒有(yǒu)熒光，可(kě)以自由通過細胞膜，進入細胞以後，可(kě)以被細胞内的酯酶水解生成DCFH。DCFH不能(néng)透過細胞膜，從而使探針很(hěn)容易裝(zhuāng)載進細胞；細胞内的活性氧可(kě)以氧化無熒光的DCFH生成有(yǒu)熒光的DCF。DCF的熒光光譜與FITC非常相似，可(kě)以用(yòng)FITC參數設置檢測，通過檢測DCF的熒光水就可(kě)以知道細胞内活性氧水平。

　　原位裝(zhuāng)載探針（僅适用(yòng)于貼壁細胞且刺激時間短于2h）：

　　1、按1:1000用(yòng)無血清培養液稀釋DCFH-DA，終濃度為(wèi)10μM；

　　2、去除細胞培養液，加入适當體(tǐ)積稀釋好的DCFH-DA（加入體(tǐ)積以能(néng)充分(fēn)蓋住細胞為(wèi)宜，通常六孔闆一個孔加入稀釋好的DCFH-DA不少于1ml）；

　　3、37℃細胞培養箱内孵育；

　　4、用(yòng)無血清細胞培養液洗滌細胞三次；

　　5、收集細胞，于流式細胞儀上分(fēn)析。

　　收集細胞後裝(zhuāng)載探針：

　　1、按1:1000用(yòng)無血清培養液稀釋DCFH-DA，終濃度為(wèi)10μM；

　　2、細胞收集後懸浮于稀釋好的DCFH-DA，細胞濃度為(wèi)1-20×10^6個/ml；

　　3、37℃細胞培養箱内孵育,每隔3-5 min颠倒混勻一次；

　　4、用(yòng)無血清細胞培養液洗滌細胞三次；

　　5、收集細胞，于流式細胞儀上分(fēn)析。