流式周期檢測

細胞周期（cell cycle）是指連續分(fēn)裂細胞從一次有(yǒu)絲分(fēn)裂結束到下一次有(yǒu)絲分(fēn)裂結束所經曆的整個過程。

所屬分(fēn)類：

流式細胞術

關鍵詞：流式周期檢測

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　　細胞周期（cell cycle）是指連續分(fēn)裂細胞從一次有(yǒu)絲分(fēn)裂結束到下一次有(yǒu)絲分(fēn)裂結束所經曆的整個過程。在這個過程中(zhōng)，細胞遺傳物(wù)質(zhì)複制并加倍，且在分(fēn)裂結束時平均分(fēn)配到兩個子細胞中(zhōng)去。細胞周期可(kě)以分(fēn)為(wèi)分(fēn)裂間期（interphase）和有(yǒu)絲分(fēn)裂期(M phase)，分(fēn)裂間期又(yòu)可(kě)以細分(fēn)為(wèi)休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成後期（G2）。利用(yòng)細胞内DNA能(néng)夠和某些特定熒光染料（如碘化丙啶-PI）結合的特性，細胞各個時期其DNA含量不同從而結合的熒光染料的量不同，通過流式細胞儀檢測熒光強度即可(kě)反映細胞周期變化情況。PI染色後，假設G0/G1期細胞的熒光強度為(wèi)1，那麽含有(yǒu)雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理(lǐ)論值為(wèi)2，正在進行DNA複制的S期細胞的熒光強度為(wèi)1~2之間。凋亡細胞由于細胞核發生濃縮以及DNA片段化(DNA fragmentation)導緻部分(fēn)基因組DNA片段在染色過程中(zhōng)丢失，因此凋亡細胞在PI染色後呈現明顯的弱染，即熒光強度小(xiǎo)于1，在流式檢測的結果圖上出現所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。

　　一、可(kě)當天檢測的活細胞樣本

　　1.收集2×10^5-1×10^6個細胞，離心棄上清。用(yòng)PBS洗滌一次，離心棄上清。

　　2.加入1 ml DNA Staining solution和10μl Permeabilization solution，渦旋振蕩5-10秒(miǎo)混勻。室溫避光孵育30分(fēn)鍾。

　　3.選擇最低上樣速度，在流式細胞儀上進行檢測。如需在熒光顯微鏡下觀察，則離心細胞，棄上清，加入新(xīn)鮮緩沖液重懸。滴加1滴細胞懸液至載玻片，蓋上蓋玻片後使用(yòng)合适的濾光片進行觀察。

　　二、當天無法檢測的活細胞樣本

　　1.按照下述方法固定，或其他(tā)合适的方法固定a.收集2×10^5-1×10^6個細胞，離心棄上清。輕彈管壁，使沉澱重懸在殘餘的液體(tǐ)中(zhōng)，加入1 ml室溫下的PBS。b.将細胞緩慢加入至3 ml無水乙醇(-20℃預冷)中(zhōng)，邊加邊高速攪拌。-20℃固定過夜，可(kě)保存數月。

　　2.檢測當天，将固定細胞離心，棄去乙醇，輕彈管壁使沉澱松散，加入2-5 ml室溫下的PBS，放置15分(fēn)鍾使細胞再次水化。離心，棄上清。

　　3.加入1 ml DNA staining solution，渦旋振蕩5-10秒(miǎo)混勻。室溫避光孵育30分(fēn)鍾。

　　4.選擇最低上樣速度，在流式細胞儀上進行檢測。如需在熒光顯微鏡下觀察，則離心細胞，棄上清，加入新(xīn)鮮緩沖液重懸。滴加1滴細胞懸液至載玻片，蓋上蓋玻片後使用(yòng)合适的濾光片進行觀察。