流式凋亡檢測

Annexin V(或Annexin A5)為(wèi)胞内蛋白膜聯蛋白家族成員，以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結合。

所屬分(fēn)類：

流式細胞術

關鍵詞：流式凋亡檢測

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　　Annexin V(或Annexin A5)為(wèi)胞内蛋白膜聯蛋白家族成員，以鈣依賴的方式與磷脂酰絲氨酸(PS)結合。PS存在于正常細胞漿膜的内層，但在凋亡早期，膜不對稱性喪失，PS易位至細胞表面。熒光标記的Annexin V可(kě)與之特異性結合，表明該細胞為(wèi)凋亡細胞。PI(碘化丙啶)是一種核酸染料，它不能(néng)透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但可(kě)以透過凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜而使細胞核染紅。因此，将Annexin V與PI聯合使用(yòng)時，PI則被排除在活細胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細胞(Annexin V+/PI-)之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被熒光标記的Annexin V和PI結合染色呈現雙陽性(Annexin V+/PI+)。搭配使用(yòng)，可(kě)區(qū)分(fēn)處于不同凋亡時期的細胞。

　　1、收集1-3×10^6個細胞（包含懸浮在培養基中(zhōng)細胞），将細胞用(yòng)預冷的PBS洗滌2次，2-8℃300-500×g離心5min，棄上清；

　　2、從樣本管中(zhōng)分(fēn)出小(xiǎo)部分(fēn)細胞，設置1管空白管和2管單染管；

　　3、用(yòng)預冷的PBS洗滌細胞一次，離心後棄上清，加入500μl預冷的1×Binding Buffer工(gōng)作(zuò)液重懸細胞；

　　4、每管樣本管中(zhōng)按試劑盒說明書加入染色液，輕輕渦旋後混勻，室溫避光孵育；

　　5、打開流式細胞儀，用(yòng)空白管調節FSC、SSC、FITC和PI通道的電(diàn)壓，在此電(diàn)壓條件下，用(yòng)單染管調節FITC與PI之間的補償，然後上機樣本。