技(jì )術服務(wù)
undefined
undefined
+
  • undefined
  • undefined

冰凍切片ROS染色

用(yòng)于檢測細胞内ROS最廣泛采用(yòng)的方法是DCFH-DA熒光探針法。DCFH-DA(二氯熒光黃雙乙酸鹽)是一種可(kě)指示的探針，其本身不具(jù)有(yǒu)熒光，但可(kě)以自由穿過細胞膜。一旦進入細胞，它會被細胞内的酯酶水解成DCFH。由于DCFH無法穿過細胞膜，因此熒光探針會在細胞内積聚。細胞内的ROS能(néng)夠氧化無熒光的DCFH，生成有(yǒu)熒光的DCF，且熒光強度與ROS水平成正比。通過熒光顯微鏡、流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡等設備，在最大激發波長(cháng)480nm和最大發射波長(cháng)525nm下檢測熒光信号。

所屬分(fēn)類：

關鍵詞：冰凍切片ROS染色

　　一、實驗原理(lǐ)

　　用(yòng)于檢測細胞内ROS最廣泛采用(yòng)的方法是DCFH-DA熒光探針法。DCFH-DA(二氯熒光黃雙乙酸鹽)是一種可(kě)指示的探針，其本身不具(jù)有(yǒu)熒光，但可(kě)以自由穿過細胞膜。一旦進入細胞，它會被細胞内的酯酶水解成DCFH。由于DCFH無法穿過細胞膜，因此熒光探針會在細胞内積聚。細胞内的ROS能(néng)夠氧化無熒光的DCFH，生成有(yǒu)熒光的DCF，且熒光強度與ROS水平成正比。通過熒光顯微鏡、流式細胞儀或激光共聚焦顯微鏡等設備，在最大激發波長(cháng)480nm和最大發射波長(cháng)525nm下檢測熒光信号。

　　二、實驗步驟

　　1、冰凍切片在室溫下複溫，控幹水分(fēn)。

　　2、用(yòng)組化筆(bǐ)在組織周圍畫圈，加自發熒光淬滅劑 5min，流水沖洗 10min。

　　3、在圈内滴加 ROS 染液， 避光恒溫箱 37°孵育 30min。

　　4、DAPI複染細胞核

　　5、抗熒光淬滅封片劑封片

　　三、結果判讀

　　DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為(wèi)藍色，陽性表達為(wèi)CY3标記的紅光。

上一頁(yè)： WGA染色

下一頁(yè)： 鬼筆(bǐ)環肽染色

如有(yǒu)問題可(kě)以留言給我們，我們将竭誠為(wèi)您服務(wù)。

提交留言

*注：請務(wù)必信息填寫準确，并保持通訊暢通，我們會盡快與你取得聯系