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線(xiàn)粒體(tǐ)DNA拷貝數檢測


哺乳動物(wù)線(xiàn)粒體(tǐ)DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)是一全長(cháng)為(wèi)16.5kb左右的雙鏈閉環分(fēn)子。
關鍵詞:線(xiàn)粒體(tǐ)DNA拷貝數檢測

實驗介紹


  哺乳動物(wù)線(xiàn)粒體(tǐ)DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)是一全長(cháng)為(wèi)16.5kb左右的雙鏈閉環分(fēn)子。與核不同的是,線(xiàn)粒體(tǐ)基因組為(wèi)多(duō)拷貝基因組。mtDNA功能(néng)的完成既依賴于每一個mtDNA分(fēn)子結構的完整性,也同時依賴于細胞中(zhōng)mtDNA的拷貝數。許多(duō)研究表明,癌症、神經退行性疾病、心血管疾病、糖尿病等疾病的發生發展與mtDNA大片段、全基因組的缺失及拷貝數變化密切相關。

實驗流程


  ①.采用(yòng)專門的DNA提取試劑盒提取。

  ②.real-time PCR檢測線(xiàn)粒體(tǐ)mtDNA拷貝數,使用(yòng)兩個mtDNA靶标(ND1,ND5)和兩個核DNA靶标(SLCO2B1,SERPINA1)。

  ③.通過實時熒光定量PCR測量mtDNA與核DNA的比例(ND1/SLCO2B1和ND5/SERPINA1的拷貝數平均值)來确定mtDNA拷貝數。

結果展示


樣本要求


  動物(wù)組織:100 mg(黃豆大小(xiǎo)),最少50 mg(綠豆大小(xiǎo)),脂肪組織,結締組織,纖維化組織适當增加,幹冰運輸。

  細胞:1×10^6個細胞,細胞沉澱,幹冰運輸。

  全血:最少1 mL新(xīn)鮮血液EDTA抗凝管,4度運輸。

  血清/血漿:500uL,幹冰運輸。

  DNA:體(tǐ)積≥50 uL,濃度≥50 ng/ul。

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