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TRAP染色

抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒顯色原理(lǐ)與酸性磷酸酶染色基本相同，在常規染色基礎上引入了抗酒石酸鹽進行酶亞型篩選，細胞或組織切片上僅抗酒石酸酸性磷酸酶活性位點着色，常規酸性磷酸酶位點不着色。該染色液可(kě)用(yòng)于新(xīn)鮮血塗片、細胞塗片，亦可(kě)用(yòng)于冰凍切片、石蠟切片。

所屬分(fēn)類：

關鍵詞：TRAP染色
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　　一、實驗原理(lǐ)

　　抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒顯色原理(lǐ)與酸性磷酸酶染色基本相同，在常規染色基礎上引入了抗酒石酸鹽進行酶亞型篩選，細胞或組織切片上僅抗酒石酸酸性磷酸酶活性位點着色，常規酸性磷酸酶位點不着色。該染色液可(kě)用(yòng)于新(xīn)鮮血塗片、細胞塗片，亦可(kě)用(yòng)于冰凍切片、石蠟切片。

　　二、實驗步驟

　　(一)樣本處理(lǐ):

　　1、細胞塗片:取新(xīn)鮮全血或骨髓制備塗片，推玻片于載玻片保持30度，置于血液或細胞滴液的正前方，稍往後移與血液或細胞滴液接觸使後者沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩向前滑動至均勻鋪開為(wèi)止，自然晾幹。

　　2、貼壁培養細胞、細胞爬片：吸去培養基，1XPBS清洗3-4次，瀝去多(duō)餘水分(fēn)。取出細胞爬片。

　　3、冰凍切片:從冰箱取出放置恢複室溫，浸入蒸餾水清洗1-2min，瀝去多(duō)餘水分(fēn)。

　　4、石蠟切片：脫蠟至水

　　(二)染色孵育:

　　1、使用(yòng) 2-8℃預冷的TRAP固定液固定30s-3min，多(duō)數情況下30-60s即可(kě)。

　　2、 蒸餾水洗，瀝去多(duō)餘水分(fēn)(不宜過分(fēn)幹燥)。

　　3、(切片處理(lǐ))滴加TRAP孵育液覆蓋切片，置于濕盒内37C溫箱孵育45-60min，蒸餾水洗。

　　4、(貼壁細胞)滴加TRAP孵育液覆蓋細胞，置于37℃溫箱孵育 45-60min，蒸餾水洗。

　　5、複染:蘇木(mù)素或甲基綠複染液染色2-3min。如選用(yòng)蘇木(mù)素染色液複染，染色後須自來水返藍10min。

　　三、結果判讀：

　　陽性細胞胞質(zhì)： 紫紅色 細胞核： 藍色(蘇木(mù)素)或綠色(甲基綠)

　　四、注意事項：

　　1：試劑B2為(wèi)偶氮染料儲備液，有(yǒu)顆粒狀懸浮物(wù)屬正常現象不影響染色。如擔心，預混合B1和B2可(kě)使顆粒物(wù)完全溶解，但需在2小(xiǎo)時内使用(yòng)完畢。

　　2：酶活易受多(duō)種因素影響導緻衰減或消失。建議樣本新(xīn)鮮取材，使用(yòng)預冷固定液在2-8℃冰箱固定，時間不宜超過24h。包埋時推薦使用(yòng)低熔點蠟(52-56℃)，避免熱失活。

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